2.1.6 preparación de los medios de cultivo
La preparación adecuada de un medio de cultivo nos permite disponer de
los nutrientes y condiciones necesarias para favorecer el crecimiento de los
microorganismos en el laboratorio.
Los medios de cultivo se pueden preparar en el laboratorio a partir de
cada uno de sus constituyentes básicos, o por simple rehidratación de productos
asequibles comercialmente (medios de cultivo deshidratados). Generalmente se
prefiere el uso de los medios de cultivo deshidratados porque, además de
simplificar el trabajo, con ellos se tiene mayor probabilidad de obtener
resultados reproducibles.
Para su preparación se deben tener en cuenta los siguientes aspectos:
• Prepararlos sólo a partir de productos que provengan de fabricantes o proveedores que suministren productos de calidad.
• Utilizar agua destilada o desmineralizada con una calidad microbiológica y fisicoquímica adecuada.
• Utilizar materiales de vidrio bien lavados y enjuagados con agua destilada o desmineralizada.
• Controlar el tiempo y la temperatura recomendada durante su esterilización. Nunca se deben exceder las condiciones señaladas por el fabricante.
ALMACENAMIENTO DE LOS MEDIOS DE CULTIVO
Los medios de cultivo deshidratados se deben almacenar en envases
sellados bajo las condiciones que señale el fabricante. Generalmente se
almacenan en un lugar fresco (entre 15 y 25°), con poca humedad y protegidos de
la luz solar directa. Nunca se deben almacenar cerca de autoclaves, hornos, ni
otra fuente de calor o vapor.
Los medios de cultivo deshidratados son higroscópicos. Cuando los
envases de estos medios de cultivo deshidratados son abiertos para su uso
inicial, se debe tener la precaución de cerrarlos tan pronto como sea posible y
mantenerlos bien cerrados para prevenir la entrada de humedad. La absorción de
agua produce cambios de pH, formación de grumos, decoloraciones del polvo,
etc., lo cual indica que deben ser descartados porque pueden haber sufrido
cambios químicos o estar contaminados.
Una vez que el medio de cultivo ha sido preparado y esterilizado, puede
almacenarse a temperatura ambiente por un periodo máximo de 2 semanas protegido
de la luz, o por periodos mayores a 12 -15ºC. Sin embargo, almacenados bajo
refrigeración entre 2 y 8°C se prolonga la vida útil de los mismos, (nunca por
debajo de 0ºC porque se destruye la estructura del gel). Los medios de cultivo
se deben mantener en recipientes bien cerrados para evitar su deshidratación y
cuando se usa tapón de algodón, se debe colocar por encima una envoltura de
papel (Craft).
Otro punto importante a tomar en cuenta, es que cada lote de medio de
cultivo preparado debe pasar por un riguroso proceso de control de calidad, en
donde se determinan sus propiedades fisicoquímicas (apariencia, pH, etc.) y
microbiológicas (esterilidad y promoción de crecimiento) verificando que
cumplan con los requisitos de calidad establecidos y por ende demostrar que son
aptos para su uso.
PROCEDIMIENTO
1. Leer cuidadosamente las instrucciones de preparación del medio de
cultivo asignado.
2. Pesar la cantidad exacta del medio deshidratado o las porciones
correctas de cada uno de los ingredientes.
Cerrar inmediatamente el frasco de medio de cultivo.
3. Disolver la porción pesada de acuerdo con las indicaciones del
fabricante.
Si es necesario calentar se debe tener cuidado de no sobrecalentar.
4. Ajustar el pH final de cada lote de medio preparado, preferiblemente
a temperatura ambiente (25°C).
Para ello se debe tomar una alícuota de 50 mL, medir el pH y de ser
necesario
ajustar al pH indicado utilizando HCl 0,1N o NaOH 0,1N. Luego hacer el
ajuste de
pH al resto del medio de cultivo utilizando la solución correspondiente
pero 1 N.
5. Distribuir el medio de cultivo de acuerdo a las indicaciones
señaladas por el profesor.
6. Identificar el lote de medio de cultivo preparado indicando su
nombre, distribución
y fecha de preparación.
7. Esterilizar de inmediato el medio de cultivo siguiendo las
instrucciones señaladas
en el trabajo práctico N° 8.
Si se presenta
algún inconveniente que impida su inmediata esterilización, el medio de cultivo
se puede almacenar por un periodo máximo de 12 horas bajo refrigeración.
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