4.2.1 ENZIMAS DE CORTE
Puede reconocer una secuencia característica de nucleótidos dentro de
una molécula de ADN y cortar el ADN en ese punto
en concreto, llamado sitio o diana de restricción, o en un sitio no muy lejano a éste. Los sitios de restricción cuentan
con entre 4 y 12 pares de bases, con las que son reconocidos.
El mecanismo de corte de DNA se realiza a través de la ruptura de dos enlaces fosfodiéster en la doble hebra, lo que da lugar a dos extremos de DNA. Éstos pueden
ser romos (cuando los enlaces rotos coinciden) o Cohesivos/escalonados. Estos
últimos tienen tendencia a volver a unirse de modo espontáneo, ya que los
extremos se pueden unir a otros extremos coincidentes que pueda haber en la
cercanía (Apareamiento de Watson & Crick).
Corte de EcoRI dejando extremos cohesivos.
Restricción de SmaI dejando extremos romos.
Uno de los campos en los que el uso de enzimas de restricción ha tenido
mayor implicación ha sido el diagnóstico de enfermedades genéticas relacionadas con cambios en la secuencia del ADN, ya sean mutaciones puntuales, inserciones o deleciones de fragmentos. Si éstas se producen en un sitio
de reconocimiento de la enzima de restricción, al producirse eliminarán o
agregarán nuevos sitios de corte. Al aplicar esta enzima al gen de una persona
sana y una enferma se deberían observar distintas cantidades de fragmentos para
cada caso en una electroforesis.
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